土壤蔗糖酶是作用物β-D-呋喃果糖苷中未還原的β-D-呋喃果糖苷末端殘基的水解酶，能酶促土中蔗糖水解成葡萄糖和果糖。今天，我們就來(lái)聊聊如何通過(guò)靛酚藍(lán)比色法檢測(cè)土壤蔗糖酶。
一.試劑
（1）3，5-二硝基水楊酸溶液：稱(chēng)0.5g二硝基水楊酸，溶于20ml?2N氫氧化鈉和50ml水中，再加18.2g酒石酸鉀鈉，用水稀釋至100ml（不超過(guò)7天）。?
（2）pH5.5磷酸緩沖液：1/15M磷酸氫二鈉（11.867g?Na2PO4?2H2O溶于1L蒸餾水中）0.5ml加1/15M?磷酸二氫鉀（9.078g KH2PO4溶于1L蒸餾水中）9.5ml即成。?
（3）8％蔗糖溶液。?
（4）甲苯。?
（5）標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液：將葡萄糖先在50-58℃條件下，真空干燥至恒重。然后取500mg溶于100ml?12mmol苯甲酸溶液中（5mg還原糖/ml），即成標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液。?
二．主要儀器
萬(wàn)分之一分析天平，恒溫箱，水浴鍋，分光光度計(jì)
三．試樣的制備
取新鮮的實(shí)驗(yàn)室待測(cè)樣品充分混勻后，按四分法縮減至?100g，粉碎，然后全部通過(guò)?10目孔徑篩，裝入樣品袋備用。?
四．分析步驟?
4.1 試樣溶液提取
稱(chēng)取試樣2g，精準(zhǔn)至0.001g，置于50ml三角瓶中，注入15ml?8％蔗糖溶液，5ml?pH5.5磷酸緩沖液和0.25ml甲苯。搖勻混合物后，放入恒溫箱，在37℃下培養(yǎng)24h。到時(shí)取出，迅速過(guò)濾，濾液供蔗糖酶的測(cè)定。
4.2 空白溶液制備
除不加待測(cè)樣品外，應(yīng)用的試劑和步驟操作同4.1
4.3 對(duì)照試樣溶液制備
除用蒸餾水代替蔗糖溶液外，應(yīng)用的試劑和步驟操作同4.1
4.4?標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制
取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml含5mg還原糖/ml的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液到50ml容量瓶中，加3ml?3，5-二硝基水楊酸，并在沸水的水浴鍋中加熱5min，隨即將容量瓶移至自來(lái)水流下冷卻3min。溶液因生成3-氨基-5-硝基水楊酸而呈橙黃色，最后用蒸餾水稀釋至50ml，并在分光光度計(jì)上于波長(zhǎng)508nm處進(jìn)行比色。? ?
4.5 試樣測(cè)定
從樣品濾液中吸取1ml，若濃度過(guò)低，可多取濾液。注入50ml容量量瓶中，加3ml?3，5-二硝基水楊酸，同測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線同樣的方法進(jìn)行顯色比色。? ? ?
五．結(jié)果計(jì)算?
蔗糖酶活性以24h后1g土壤葡萄糖的毫克數(shù)表示。?
葡萄糖（毫克）＝a×50×ts/m?
a－顯色液中葡萄糖濃度（mg/ml），?
50－顯色液體積（ml）；?
ts－分取倍數(shù)（吸1ml濾液比色就是20/1）；?
m－烘干土質(zhì)量（g）。