深秋時(shí)分，銀杏葉四處飄散的景象令人著迷，踏上去如行走在棉花糖上...據(jù)相關(guān)資料顯示，銀杏葉為銀杏科植物銀杏Ginkgo biloba L .的干燥葉。其主要含黃酮類(lèi)（flavonoids）和萜烯內(nèi)酯（terpene）類(lèi)化合物。據(jù)醫(yī)學(xué)藥理研究證實(shí)，銀杏葉黃酮具有抗炎癥、抗環(huán)腺苷酸乙酯酶活性、抗組胺活性等多種效用。今天，栢暉生物就給大家梳理一下如何通過(guò)比色法測(cè)定植物中黃酮的含量。
一、試劑
所有試劑除注明者外，均為分析純。
1.1 蘆丁對(duì)照品、80%乙醇、30%乙醇、
1.2 0.05g/ml NaNO2:稱(chēng)取1.7225g亞硝酸鈉定容到500ml。
1.3 0.1g/ml Al(NO3)3:稱(chēng)取18.7565g硝酸鋁定容到500ml。
1.4 0.04g/ml NaOH溶液:稱(chēng)取0.8g氫氧化鈉定容到500ml。
二、主要儀器
萬(wàn)分之一分析天平、紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)
三、試樣的制備
取風(fēng)干的實(shí)驗(yàn)室待測(cè)樣品充分混勻后，粉碎，籽粒全部通過(guò) 0.25mm（秸稈通過(guò) 0.5mm）孔徑篩，裝入樣品瓶備用。
四、分析步驟
4.1 試樣溶液制備
取待測(cè)樣品，研細(xì)，精密稱(chēng)取約0.3g，用80%乙醇回流提取2次（每次用30ml）過(guò)濾，濾液合并后蒸干，用30%乙醇溶解并定容至10ml。
4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制
標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)的繪制：精密量取蘆丁對(duì)照品溶液0.0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml到10ml容量瓶中，各加入30%乙醇至1.0ml，加入0.5ml 0.05g/ml NaNO2溶液，放置6min后再加入0.3ml0.1g/ml Al(NO3)3溶液，搖勻，放置6min后加入3ml 0.04g/ml NaOH溶液，用水定容至標(biāo)線(xiàn)，搖勻，放置15min，在510nm處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，蘆丁對(duì)照品溶液的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)。
4.3 樣品的測(cè)定
精密量取樣品溶液1.0ml，置于10ml容量瓶中，按照標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)繪制的方法，自加入0.5ml 0.05g/ml NaNO2溶液起依次測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)上查得樣品溶液中蘆丁的濃度，作為總黃酮的濃度，再計(jì)算求得總黃酮的含量。
五、結(jié)果計(jì)算
式中:
C——從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)查得黃酮的含量，μg/g；
N——稀釋倍數(shù)；
Vt——提取液總體積，ml；
Vs——測(cè)定取液量，ml；
0.001——將μg換算為mg；
m——樣品稱(chēng)重量。所得結(jié)果應(yīng)保留小數(shù)點(diǎn)后三位