植物葉綠素、類胡蘿卜素的測定方法

日期： 2022-04-26

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一、?實(shí)驗(yàn)原理和目的? ???

根據(jù)朗伯—比爾定律，某有色溶液的吸光度A與其中溶質(zhì)濃度C和液層厚度L成正比?。?葉綠素和類胡蘿卜素在95%的乙醇提取液中的最大吸收峰波長不同，葉綠素(95%乙醇)在665nm、649nm，類胡蘿卜素在470nm有最大吸收峰，根據(jù)在分光光度計(jì)下測定的吸光度，求得葉綠素及類胡蘿卜素的含量。

二、?實(shí)驗(yàn)器具和步驟??

實(shí)驗(yàn)器具：分光光度計(jì)（UV-1800PC，上海美普達(dá)儀器有限公司）、電子天平（ES-J220，天津市德安特傳感技術(shù)有限公司）、研缽、?試管、小漏斗、濾紙、吸水紙、?移液管、量筒、剪刀? ；

試劑：?95％乙醇（或80％丙酮）、石英砂、碳酸鈣粉；?

步驟：

1.稱取剪碎的新鮮樣品0.1g?左右，放入研缽中，加少量石英砂和碳酸鈣粉及3～5ml?95％乙醇，研成均漿，繼續(xù)研磨至組織變白，靜置3～5min?。

2.?取濾紙1張，置漏斗中，用乙醇濕潤，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，過濾到10ml試管中，用少量乙醇沖洗研缽、研棒及殘?jiān)鼣?shù)次，最后連同殘?jiān)黄鸬谷肼┒分小?

3.用滴管吸取乙醇，將濾紙上的葉綠體色素全部洗入漏斗中。直至濾紙和殘?jiān)袩o綠色為止。最后用乙醇定容至10?ml?，搖勻。

4.把葉綠體色素提取液倒入光徑1cm的比色杯內(nèi)。以95％乙醇為空白，在波長665nm、649nm、470nm下測定吸光度?

計(jì)算公式：?

?Ca=13.95A665－6.88A649；?

Cb=24.96A649－7.32A665???

Cx=(1000A470-2.05Ca-114.8Cb)/245

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