單寧即鞣酸是多酚類物質(zhì),主要有2類,一是縮合單寧即黃烷醇衍生物,另一類是可水解單寧,通常為糖類化合物的焦性沒(méi)食子酸酯。
目前,對(duì)單寧含量測(cè)定方法的研究較多,有皮粉法、高錳酸鉀滴定法、EDTA滴定法、酒石酸亞鐵鰲合法、香草醛法、Folin-Denis法和Folin-Ciocalteu法、鐵氰化鉀分光光度法、液相色譜法和原子吸收法、毛細(xì)管電泳及化學(xué)發(fā)光法、高靈敏示波電位動(dòng)力學(xué)分析法、熒光動(dòng)力學(xué)分析法等,但上述單寧測(cè)定的傳統(tǒng)方法大都比較繁瑣、而在眾多單寧含量的測(cè)定方法中,分光光度法的應(yīng)用最為廣泛,但其法使用的鰲合劑眾多,對(duì)單寧的提取方法和測(cè)定條件也根據(jù)不同的被測(cè)物不同而異。
1.EDTA絡(luò)合滴定法
根據(jù)單寧可與重金屬離子形成絡(luò)合物沉淀的性質(zhì)，在樣品提取液中加入過(guò)量的標(biāo)準(zhǔn)Zn(Ac)2溶液，待反應(yīng)完全后，再用EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定剩余的，根據(jù)EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的消耗量，可計(jì)算出樣品中單寧的含量。
2.高錳酸鉀法
作為多酚，單寧是一種強(qiáng)還原劑，極易被氧化劑氧化，還可被活性炭吸附。本測(cè)定以高錳酸鉀為氧化劑，根據(jù)樣品中單寧可以被活性炭吸附，測(cè)定樣品液用活性碳吸附前后的氧化值之差，計(jì)算單寧物質(zhì)的含量。
3.比色法
用二甲基甲酰胺溶液振蕩提取植物中單寧，過(guò)濾后取濾液，在氨存在的條件下，與檸檬酸鐵銨形成一種棕色絡(luò)合物，用分光光度計(jì)在525nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度值，與標(biāo)準(zhǔn)系列比較定量。
樣本前處理制備：
樣品棄去雜質(zhì)，用機(jī)械粉碎機(jī)粉碎，并全部通過(guò)1.0mm孔徑的篩子，充分混勻。
1、試樣溶液制備
稱取試樣約1.0g，精確至0.0001g至于100mL三角瓶中，準(zhǔn)確加入50mL 75%二甲基甲酰胺溶液，加塞子密封，于振蕩機(jī)上振蕩60min，然后用雙層濾紙過(guò)濾，濾液備用。
2、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制
用75%二甲基甲酰胺溶液配置標(biāo)準(zhǔn)溶液系列分別相當(dāng)于0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5mg/mL的單寧酸。
吸取以上單寧酸標(biāo)準(zhǔn)溶液系列1.0mL，置于6只試管中，準(zhǔn)確加入5.0mL水和1.0mL檸檬酸鐵銨溶液，振蕩混勻，再各加1.0mL氨溶液，充分振蕩混勻，靜置。自加氨水10min后，以水作空白，用分光光度計(jì)在525nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值。
以吸光度值作為縱坐標(biāo)，以單寧酸標(biāo)準(zhǔn)溶液系列中單寧酸含量（mg/mL）作橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3、樣品測(cè)定
取上述濾液1.0mL，置于試管中，加6.0mL水和1.0mL氨溶液，振蕩混勻、靜置。自加氨水10min后，以水作空白，用分光光度計(jì)在525nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值。
取上述濾液1.0mL，置于試管中，加5.0mL水和1.0mL檸檬酸鐵銨溶液，振蕩混勻，再加1.0mL氨溶液，充分振蕩混勻、靜置。自加氨水10min后，以水作空白，用分光光度計(jì)在525nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值。結(jié)果為兩次測(cè)定吸光度值之差。