? 果糖是一種單糖,是葡萄糖的同分異構體,分子式為C6H12O6。它有一下一些特征:以游離狀態(tài)大量存在于水果的漿汁和蜂蜜中,還能與葡萄糖結合生成蔗糖;純凈的果糖為無色晶體,熔點為103~105℃,它不易結晶,通常為黏稠性液體,易溶于水、乙醇和乙醚。以下給大家分享下如何通過間苯二酚比色法檢測植物中的果糖。
一、實驗試劑
所有試劑除注明者外,均為分析純。
1.1 ?0.1%間苯二酚: 稱取0.1g間苯二酚溶液于100mL 95%乙醇溶液(棕色瓶內保存);
1.2 標準果糖溶液:稱取50mg烘至衡重的果糖,用80%乙醇配成1000ml溶液,得到質量濃度為50ug/ml的果糖溶液;
1.3 80%乙醇;
1.4 濃鹽酸。
二、實驗儀器
分光光度計、恒溫水浴鍋、電子天平、烘箱、刻度離心管、帶塞試管、漏斗等。
三、試樣的制備
取風干的實驗室待測樣品充分混勻后,按四分法縮減至 100g,粉碎,籽粒全部通過100目篩,裝入樣品瓶備用。
四、分析步驟
4.1 樣品提取
稱取50mg樣品倒入10ml刻度離心管內加入4ml 80%乙醇,至于80℃水浴中不斷攪拌40min ,離心,收集上清液,其殘渣加2ml 80%乙醇重復提2次,合并上清液。80%乙醇定容至10ml,過濾后取濾液測定。
4.2 制作標準曲線
按照下表準備6支試管,進行編號加試劑:
編號 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
果糖標準液/ml | 0 | 0.1 | 0.2 | 0.3 | 0.4 | 0.5 |
80%乙醇/ml | 1 | 0.9 | 0.8 | 0.7 | 0.6 | 0.5 |
HCl/ml | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
間苯二酚/ml | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 |
80℃水浴反應10min,冷卻至室溫,在480nm處測定OD值,以0濃度管調零。繪制成果糖質量濃度-OD 值曲線。
4.3 顯色測定
取植物提取液代替標準果糖溶液,按上述步驟進行果糖含量的測定,讀取?OD值,從標準曲線得到提取液總的果糖含量,然后再行計算樣品中的果糖含量。
五、結果計算
果糖含量(%)=【(a×V總×n)/(V測×m×106)】×100%
式中:
a——由標曲計算所得還原糖含量,ug;
V總——樣品提取液總體積,ml;
n——為樣品提取液稀釋倍數
V測——顯色測定時吸取樣品液體積,ml;
m——樣品干重,g;
106——ug換算成g 。