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植物果糖檢測——間苯二酚比色法

日期: 2021-09-14
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? 果糖是一種單糖,是葡萄糖的同分異構體,分子式為C6H12O6。它有一下一些特征:以游離狀態(tài)大量存在于水果的漿汁和蜂蜜中,還能與葡萄糖結合生成蔗糖;純凈的果糖為無色晶體,熔點為103~105℃,它不易結晶,通常為黏稠性液體,易溶于水、乙醇和乙醚。以下給大家分享下如何通過間苯二酚比色法檢測植物中的果糖。

植物果糖檢測——間苯二酚比色法

一、實驗試劑

所有試劑除注明者外,均為分析純。

1.1 ?0.1%間苯二酚: 稱取0.1g間苯二酚溶液于100mL 95%乙醇溶液棕色瓶內保存);

1.2 標準果糖溶液:稱50mg烘至衡重的果糖,用80%乙醇配成1000ml溶液,得到質量濃度為50ug/ml的果糖溶液;

1.3 80%乙醇;

1.4 濃鹽酸。


二、實驗儀器

分光光度計、恒溫水浴鍋電子天平、烘箱、刻度離心管、帶塞試管、漏斗等。


三、試樣的制備

取風干的實驗室待測樣品充分混勻后,按四分法縮減至 100g,粉碎,籽粒全部通過100目篩,裝入樣品瓶備用。


四、分析步驟

4.1 樣品提取

50mg樣品倒入10ml刻度離心管內加入4ml 80%乙醇,至于80℃水浴中不斷攪拌40min ,離心,收集上清液,其殘渣加2ml 80%乙醇重復提2次,合并上清液。80%乙醇定容至10ml,過濾后濾液測定。

4.2 制作標準曲線

按照下表準備6支試管,進行編號加試劑:

編號

1

2

3

4

5

6

果糖標準液/ml

0

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

80%乙醇/ml

1

0.9

0.8

0.7

0.6

0.5

HCl/ml

1

1

1

1

1

1

間苯二酚/ml

2

2

2

2

2

2

80℃水浴反應10min,冷卻至室溫,在480nm處測定OD值,以0濃度管調零。繪制成果糖質量濃度-OD 值曲線。

4.3 顯色測定

取植物提取液代替標準果糖溶液,按上述步驟進行果糖含量的測定,讀取?OD值,從標準曲線得到提取液總的果糖含量,然后再行計算樣品中的果糖含量。

五、結果計算

果糖含量(%=【(a×V×n)/(V×m×106)】×100%

式中:

a——由標曲計算所得還原糖含量,ug;

V——樣品提取液總體積,ml;

n——為樣品提取液稀釋倍數

V——顯色測定時吸取樣品液體積,ml;

m——樣品干重,g;

106——ug換算成g 。


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