今天給大家分享一下如何通過比色法對Vc的含量進行測定,如下:
一、試劑
所有試劑除注明者外,均為分析純。
1.?Vc標準液:準確稱取抗壞血酸0.1000g,用配好的草酸-EDTA定容至100ml。
2.?草酸-EDTA:稱取含結晶水的草酸6.3000g,EDTA 0.0584g,充分溶解后定容至1000ml。
3.?偏磷酸-乙酸:稱取15.0000g偏磷酸于40ml乙酸中,定容至500ml,用濾紙過濾,取濾液備用。
4.?5%H2SO4:吸取5ml硫酸稀釋至100ml。
5. ?5%鉬酸銨:準確稱取鉬酸銨25.0000g,定容至500ml。
二、主要儀器
萬分之一分析天平、UV-1800PC紫外可見分光光度計
三、試樣的制備
待測樣品混勻后裝入塑封袋4℃冷藏備用。
四、分析步驟
4.1 試樣溶液制備
稱取植物物組織2~5g(根據(jù)維生素C含量而定),加5ml草酸-EDTA溶液磨成勻漿,并轉入25ml容量瓶中,再用提取介質沖洗研缽及研錘2~3次,沖洗液合并于25ml容量瓶中。取一部分勻漿經(jīng)3000g離心10min后保存。
4.2 標準曲線繪制
吸取VC標準溶液 0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0分別置于50mL比色管中,用草酸-EDTA補充至5ml,加入偏磷酸-乙酸0.5ml,加入5%硫酸1ml,再加入5%鉬酸銨2ml。
加完試劑搖勻后,置30℃水浴中保溫15min,用蒸餾水稀釋到25 mL刻度,將溶液混勻,用空白管調零,在760nm波長下比色,記錄吸光度,以標準維生素C含量為橫坐標,吸光度為縱坐標,繪制標準曲線。
4.3 樣品的測定
取1ml上清液與標曲同法測定。若樣品顯色液中出現(xiàn)沉淀時,可過濾后比色,不影響測定結果。
五、結果計算
植物組織中維生素C的含量(mg)=
式中:
C——標準曲線上查得樣品中維生素含量(mg);
Vt——樣品提取液總體積(ml);
Vs——測定時用樣品液體積(ml);
FW——植物組織鮮重(g)。
【附注】
溫度對顯色有影響,顏色強度隨時間的延長而加深,因此顯色溫度和加入顯色劑的時間要求一致。