? ? ? ? 可溶性蛋白指可以以小分子狀態(tài)溶于水或其他溶劑的蛋白。通常在植物生理、微生物、食品加工等實驗中作為重要指標。如可溶性蛋白是植物抗旱性的重要指標之一。今天栢暉生物就給大家分享一下如何通過考馬斯亮藍染色法測定植物中的可溶性蛋白：
“1試劑
所有試劑除注明者外，均為分析純。
1.1 考馬斯亮藍溶液配制：稱取100 mg考馬斯亮藍，溶于50ml 90%乙醇中，加入100ml 85%（W/V）磷酸，再用蒸餾水定容到1L。在過夜后過濾并貯于棕色瓶中，常溫下可保存一個月。
1.2 90% 乙醇
1.3 100 g/ml 牛血清蛋白（BSA）標準溶液：稱取10mg BSA定容至100 ml即為100 g/ml。或稱取25 mg BSA加蒸餾水水溶解后定容至100 ml，再從中吸取40 ml蒸餾水定容至100ml。
1.4 0.05 mol/LpH7.8磷酸配制：
A母液，0.2 mol/L磷酸氫二鈉溶液：取Na2HPO4·12H2O (分子量358.14)35.85 g，用蒸餾水定容至500 ml。
B母液，0.2 mol/L磷酸二氫鈉溶液：取NaH2PO4·2H2O (分子量156.01)1.5601 g，用蒸餾水定容到50 ml。
1.5 0.05M pH7.8磷酸：分別取A母液228.75ml，B母液21.25ml，用蒸餾水定容至1000ml。
“2主要儀器
萬分之一分析天平、紫外可見分光光度計、離心機
“3試樣的制備
取風干的實驗室待測樣品充分混勻后，籽粒全部通過 0.25mm（秸稈通過 0.5mm）孔徑篩，裝入樣品瓶備用。
“4分析步驟
4.1 試樣溶液制備
樣品提?。喝□r樣0.2—0.5g，用蒸餾水或緩沖液研磨成勻漿后，3000r/min—4000r/min離心10min，上清液備用。
4.2 標準曲線繪制
取6支具塞試管，依次加入標液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，然后用蒸餾水補充至1ml，再向各管中加入5ml考馬斯亮藍試劑，5min左右，以0號試管為空白對照，在595nm下比色測定吸光度，以蛋白質(zhì)含量為橫坐標，以吸光度為縱坐標繪制標準曲線。
4.3 樣品的測定
吸取樣品提取液1.0ml（視蛋白質(zhì)含量適當稀釋），放入試管中（每個樣品重復兩次），加入5ml考馬斯亮藍試劑，搖勻，放置2min待反應完成，在595nm下比色，測定吸光度，并通過標準曲線查蛋白質(zhì)含量。
“5結(jié)果計算
式中：
C—查標準曲線值，g；
Vt—提取液總體積，ml；
WF—樣品鮮重，g；
Vs—測定時加樣量，ml
所得結(jié)果應保留小數(shù)點后三位