一.試劑
1.無乙醇氯仿：氯仿中含有少量乙醇做穩(wěn)定劑，乙醇會影響氯仿在低壓下沸騰。所以需要提純。
提純：在通風(fēng)櫥中，將氯仿（三氯甲烷）按1:2的體積比與蒸餾水一起加入分液漏斗中，充分搖動1min，慢慢放出下層氯仿于燒杯中，如此重復(fù)洗滌三次。得到無乙醇氯仿，加入適量無水氯化鈣，去除氯仿中的水分?？芍貜?fù)使用。
2.0.5mol/L硫酸鉀溶液：稱取硫酸鉀87.1g，溶于去離子水中，稀釋至1000ml
3.1mol/L NaoH溶液：稱取氫氧化鈉（AR）4g，置于一大燒杯中，并立即倒出，然后加入不含CO2的蒸餾水約100mL，將溶液注入細口瓶中，塞緊橡皮塞，混勻，備用。
4.沸石
二．主要儀器
自動有機碳分析儀、真空干燥器、小燒杯（蒸發(fā)皿）、中速定量濾紙、漏斗、震蕩儀、萬分之一分析天平
三．試樣的制備
取新鮮的實驗室待測樣品充分混勻后，按四分法縮減至 100g，粉碎，然后全部通過10目孔徑篩，裝入樣品袋備用。
四. 分析步驟
4.1 試樣溶液提取
4.1.1.稱取試樣5～10g（相當(dāng)于干土10g，取部分樣測含水量，確定稱取土樣重量）2份，分別放入25ml小燒杯（培養(yǎng)皿）中。將盛有一份土樣的燒杯放入真空干燥器中，并放置盛有無乙醇氯仿（約放置燒杯2/3的量）的25ml燒杯，燒杯內(nèi)放入少量沸石，同時放入盛有1mol/L NaOH溶液的小燒杯（吸收熏蒸過程中釋放出來的CO2）。
4.1.2.蓋上真空干燥器蓋子，用真空泵抽真空，使氯仿保持沸騰5min。關(guān)閉真空干燥閥門，于25度黑暗條件下培養(yǎng)24h。另一份樣至于另一干燥器中為不熏蒸對照處理。
4.1.3.熏蒸結(jié)束后，打開真空干燥器閥門（應(yīng)該聽到空氣進入的聲音，否則熏蒸不完全，重做，取出盛有氯仿（可重復(fù)利用）和稀NaOH溶液的小燒杯，清潔干燥器，反復(fù)抽真空（5到6次，每次30分鐘，每次抽真空后最好完全打開干燥器蓋子），直到土壤無氯仿味道為止。
4.1.4.從干燥器中取出熏蒸和未熏蒸土樣，將土樣轉(zhuǎn)移到50ml聚乙烯離心管（塑料瓶）中，加入40ml 0.5mol/L 硫酸鉀溶液（土水比1：4）800 r/min振蕩30分鐘，用中速定量濾紙過濾。土壤提取液最好立刻分析，或--20℃冷凍保存，使用前需解凍搖勻。
4.2 空白溶液制備
取10ml硫酸鉀溶液作為空白。
4.3 試樣測定
吸取上述土壤提取液10ml（若濃度過高則稀釋）注入自動總有機碳（TOC）分析儀上，測定提取液有機碳、N含量。（儀器使用方法待定）
五．結(jié)果計算
土壤微生物生物量碳： Bc=Ec/Kec
Ec為熏蒸與未熏蒸土壤的差值；
Kec為轉(zhuǎn)換系數(shù)，取值為0.45
土壤微生物生物量氮： Bc=EN/Ken
EN為熏蒸與未熏蒸土壤的差值；
Ken為轉(zhuǎn)換系數(shù)，取值為0.25
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