脫氫酶是一類氧化還原酶，它的作用是催化氫從被氧化的物體(基質(zhì)AH)中轉(zhuǎn)移到另一個物體(受氫體B)上:
AH+B?A+BH
已知受氫體可以接受脫氫酶脫出的氫原子，根據(jù)接受氫原子的量可以判斷脫氫酶的活性。無色的氯化三苯基四氮唑(TTC，俗稱紅四唑)接受氫后變成紅色的三苯基甲瓚(TF)，根據(jù)產(chǎn)生紅色的色度進(jìn)行比色定量分析，就可以判斷脫氫酶的活性。
一、主要儀器和試劑
分光光度計（UV-1800PC，上海美普達(dá)儀器有限公司）
電子分析天平（JJ124BC，常州市雙杰測試儀器廠）
離心機(jī)（KH20A，湖南凱達(dá)科學(xué)儀器有限公司）
水浴鍋（HH-6孔，祥達(dá)儀器）
0.36%Na2SO3 溶液：稱取0.3657g亞硫酸鈉溶于100ml蒸餾水中；
0.05M Tris-HCl緩沖液(PH=7.6)：稱取三羥甲基氨基甲烷，加1.0MHCl 20毫升，蒸餾水定容至1L；
0.4%TTC（氯化三苯基四氮唑）：稱取0.4克TTC溶于100毫升蒸餾水中，每周新配；
Na2S2O4，甲醛，丙酮（分析純）
二、操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
（1）按下表配置系列濃度的TTC標(biāo)準(zhǔn)溶液。
（2）顯色
用藥匙向每只比色管中各加入少許連二亞硫酸鈉(Na2S2O4)，混勻，使TTC全部還原為紅色的TF。用1~5ml移液槍向各管滴加1ml甲醛終止反應(yīng)，搖勻后再加入2ml丙酮震蕩搖勻，37℃水浴10min。
（3）測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
在485nm波長下測定各管溶液的吸光度A，并以A為縱坐標(biāo)，TTC濃度為橫坐標(biāo)，繪制出TTC標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2.壤脫氫酶活性的測定
（1）培養(yǎng)并顯色
首先，按下表向四支離心管中分別加入以下物質(zhì)
然后將以上四支離心管避光，37℃保溫培養(yǎng)24h。
（2）培養(yǎng)結(jié)束后，用1~5ml可調(diào)試移液槍向各管分別加入1ml甲醛終止反應(yīng)；再分別加入2ml丙酮震蕩并于37℃下水浴保溫10min。
（3）離心；將各離心管置于離心機(jī)中，4000r/min離心5min。
（4）測吸光度；取上清液在485nm波長下測定吸光度A，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的TTC濃度。
3.土壤脫氫酶活性的計算
脫氫酶活性（ug/g土/24h）=A×B×C
式中：
A為標(biāo)準(zhǔn)曲線中查的TTC濃度（μg/ml）；
B為培養(yǎng)時間的校正值（h）；
C為比色時的稀釋倍數(shù).