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2024
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土壤氨基糖實驗流程如下：一、實驗方法及原理氨基糖在吡啶-甲醇溶液中,以 4-二甲氨基吡啶為催化劑的條件下與鹽酸羥胺和乙酸酐發(fā)生糖腈乙酰酯反應, 所得衍生物可利用氣相色譜測定。二、實驗步驟2.1主要實驗儀器? ?GC（毛細管分流進樣口， FID檢測器）鼓風烘箱（涵蓋105℃，可定時8h）渦旋混合儀（2850rpm）離心機（50mL，3650rpm）冷凍干燥機水浴鍋（45℃、80℃）旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（100mL，65℃）離心機（5mL，8000rpm）2.2 實驗步驟1、水解：稱取約0.5~1.0g的土樣于水解管中，沿管壁加入5 mL 6 mol/L鹽酸，用氮氣置換水解管中空氣2min后密封。在烘箱中105℃放置8h水解。2、凈化：a) 除酸：待水解液冷卻至室溫后，加入200μgN-甲基氨基葡萄糖（1mg/mL水溶液，200μL）。渦旋儀震蕩30s混勻。取部分水解液于5mL離心管中，于8000rpm離心1min。取上清液2.5mL于50mL離心管中用氮氣于65℃吹干。用25mL純水溶解吹干后的殘渣。加0.4mol/LKOH和0.01mol/LHCL調(diào)節(jié)pH至6.6~6.8。b) 除鹽：離心管以3000rpm離心5min，轉(zhuǎn)移出上清液于100mL茄型瓶中，于65℃，25rpm旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干。再加入10mL無水甲醇分兩次溶解瓶中殘渣。后轉(zhuǎn)移至另一50mL離心管。氮吹至5mL以下，渦旋溶解管壁有機物后，以4000rpm離心5min，除鹽。再將上清液轉(zhuǎn)移到5mL衍生瓶中并加入100μg戊五醇（1mg/mL水溶液，100μL），于40℃氮氣吹干。3、標準樣品制備：同時準備3個標準樣品。另取衍生瓶中加入100μL混標（1mg/mL的氨基葡萄糖、氨基半乳糖、氨基甘露糖，0.5mg/mL胞壁酸），100μgN-甲基氨基葡萄糖（1mg/mL水溶液，100μL），100μg戊五醇（1mg/mL水溶液，100μL），輕輕搖勻后，與樣品衍生瓶一起吹干。4、衍生：a) 向吹干的樣品和標準樣品的衍生瓶中加入300μL衍生試劑（稱取鹽酸羥胺320mg，4-二甲基氨基吡啶400mg，用吡啶：甲醇=4:1（v:v）溶液溶解稀釋至10ml）后蓋緊。渦旋30s混勻。b) 在80℃水浴35min，每5min震蕩一次。冷卻至室溫后加入1mL醋酐，渦旋30s混勻后，在80℃水浴25min，每5min震蕩一次。衍生管冷卻至室溫后加入1.5mL二氯甲烷，渦旋30s混勻。5、衍生物凈化：a) 往衍生管中加入1mL1mol/LHCL（取6 mol/L鹽酸約17mL，...