作者：
發(fā)布時間：
2022
-
06
-
21
點擊次數(shù)：
0
一、試劑所有試劑除注明者外，均為分析純。實驗用水均為蒸餾水或去離子水。（1）甲苯（2）1%羧甲基纖維素溶液：1g 羧甲基纖維素鈉，用50%的乙醇溶至100ml。（3）pH5.5醋酸鹽緩沖液：0.2mol/L 醋酸溶液 11.55ml 95% 冰醋酸溶至1L；0.2mol/L 醋酸鈉溶液 16.4g C2H3O2Na或27.22g C2H3O2Na·3H2O溶至1L；取11ml 0.2mol/L 醋酸溶液和88ml 0.2mol/L 醋酸鈉溶液混勻即成PH 5.5醋酸鹽緩沖液。（4）3,5-二硝基水楊酸溶液：稱1.25g二硝基水楊酸，溶于50ml 2mol/L NaOH和125ml水中，再加75g酒石酸鉀鈉，用水稀釋至250ml（保存期不過7天）。（5）葡萄糖標準液（1mg/mL）預先將分析純葡萄糖置80℃烘箱內(nèi)約12小時。準確稱取50mg葡萄糖于燒杯中，用蒸餾水溶解后，移至50mL容量瓶中，定容，搖勻（冰箱中4℃保存期約一星期）。若該溶液發(fā)生混濁和出現(xiàn)絮狀物現(xiàn)象，則應棄之，重新配制。二、儀器分析天平(0.0001 g)、50ml試管、恒溫箱、水浴鍋（HH-4）、吸管(10 ml)、三角瓶(50 ml)、小漏斗、量筒(100 ml)、角匙、試管夾、吸耳球、試劑瓶(500ml)、記號筆等。三、葡萄糖標準曲線分別吸1mg/mL的標準葡糖糖溶液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mL于試管中，再補加蒸餾水至1mL，加DNS溶液3ml混勻，于沸騰水浴中加熱5min，取出立即泠水浴中冷卻至室溫，以空白管調(diào)零在波長540nm處比色，以O(shè)D值為縱坐標，以葡萄糖濃度為橫坐標繪制標準曲線。四、實驗步驟稱10g土壤置于50ml三角瓶中，加入1.5ml甲苯，搖勻后放置15min，再加5ml 1%羧甲基纖維素溶液和5ml pH5.5醋酸鹽緩沖液，將三角瓶放在37℃恒溫箱中培養(yǎng)72h。培養(yǎng)結(jié)束后，過濾并取1ml濾液，然后按繪制標準曲線顯色法比色測定。（為了消除土壤中原有的蔗糖、葡萄糖而引起的誤差，每一土樣需做無基質(zhì)對照，整個試驗需做無土壤對照；如果樣品吸光值超過標曲的最大值，則應該增加分取倍數(shù)或減少培養(yǎng)的土樣。）五、結(jié)果計算纖維素酶活性以72h，10g干土生成葡萄糖毫克數(shù)表示。其中：a樣品、a無土、a無機質(zhì)分別表示其由標準曲線求的葡萄糖毫克數(shù)；n為分取倍數(shù)；m表示烘干土重。