在110℃烘箱烘15min,然后調(diào)至70℃烘干至恒重。實驗材料(各種植物葉片或種子)磨碎后,?秤取50mg樣品倒入10ml刻度離心管內(nèi)加入4ml 80%乙醇,至于80℃水浴中不斷攪拌40min?,離心,收集上清液,其殘渣加2ml 80%乙醇重復(fù)提2次,合并上清液。80%乙醇定容至10ml,過濾后取濾液測定。
取蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液用80%乙醇稀釋成系列(0、10、20、30、40、60、80、100ug/ml)濃度的溶液。分別取0.4ml溶液,各自加入200ul 2mol/L NaOH,100℃煮沸5min,冷卻,加入2.8ml 30%HCl,0.8ml 0.1%間苯二酚,搖勻,80℃水浴反應(yīng)10min,冷卻后在480nm測定OD值,以0濃度管調(diào)零。繪制蔗糖濃度-OD值曲線。
取提取液0.4ml,按上述步驟進(jìn)行蔗糖含量的測定,讀取OD值,并從標(biāo)準(zhǔn)曲線得到提取液中的糖含量,然后再進(jìn)行計算樣品中的蔗糖含量。
用堿性溶液同植物材料的可溶性糖提取液一起加熱,破壞其中的還原糖。然后用蒽酮法在較低的溫度下,測定蔗糖中的果糖部分。不含果糖苷的其他糖類在較低的溫度下不與蒽酮顯色,材料中如含有其他帶有果糖苷的非還原糖(如:棉子糖、松三糖和土木香粉)對測定會有干擾,但是在有蔗糖存在的生物材料中這些糖幾乎是不存在的。
植物材料(植物的根、莖、葉)在110℃下殺青,經(jīng)70~80℃烘干研磨, 80%的乙醇,在80℃下提取半小時,離心取上清液,共提取3次。合并上清液,加少許(約0.1克)活性炭脫色,并定容至10ml。根據(jù)蔗糖含量的多少吸取0.1~ 1.0ml于試管中,沸水浴中加熱濃縮至0.05~0.1ml (不要大于0.1ml,否則顯色時間要延長),加入0.1ml30%的KOH,在沸水浴中放10min, 冷卻至室溫。加入3ml蒽酮試劑,40 ℃保溫10~15min, 在620nm測定吸光度值。同時取20~100ug蔗糖(在0.1ml體積中)于一系列試管中, 加入0.1ml30%KOH以同法顯色,做成標(biāo)準(zhǔn)曲線。
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