1、試劑
檸檬酸（AR）?檸檬酸三鈉（AR） 無水甲醇（AR） 三氯甲烷（AR） 丙酮（AR） 甲苯（AR） 氫氧化鉀（AR）?冰乙酸（AR） 正己烷（色譜純）?十九烷酸甲酯（19：0）
2、儀器
氣相色譜儀 凍干機(jī) 振蕩儀 過柱裝置 水浴鍋 水浴氮吹儀?干式氮吹儀?高速離心機(jī)
3、材料
高速離心管 試管（100 mL、5 mL） 10 mL具塞試管 3 mL硅膠柱 玻璃滴管（可拆卸橡膠頭）黑色塑料袋 玻璃量筒（1 mL、5 mL） 移液器（5 mL、1 mL、100 μL）
4、試劑制備
檸檬酸緩沖液：稱取檸檬酸37.5 g，檸檬酸三鈉44.1 g，溶于1 L超純水中。
提取液：依次加入檸檬酸緩沖液64 mL、無水甲醇160 mL、三氯甲烷80 mL，混合均勻。（現(xiàn)用現(xiàn)配，低溫隔夜會析出鹽）。
甲醇甲苯混合溶液（1：1）：15 mL無水甲醇、15 mL甲苯混合均勻（現(xiàn)用現(xiàn)配）。
0.5 mol/L KOH溶液：稱取28.05 g KOH，溶于1 L超純水中。
0.2 mol/L KOH甲醇溶液（2：3）：取0.5 mol/L KOH溶液40 mL，溶入60 mL無水甲醇。
1 mol/L冰乙酸溶液：取1.74 mL冰乙酸，溶入30 mL去離子水。
5、樣品處理
土樣凍干：稱取土壤4.00 g（沙土8.00g）于高速離心管中，冰凍過夜，隨后放入凍干機(jī)凍干。
土壤含水率測定：稱取土壤5.00 g于105 ℃下烘干3 h，隨后冷卻至室溫，取出稱重，計算含水率。
6、測定
6.1取出凍干土樣，加入23ml提取液，避光振蕩2h；
6.2離心取上清液，重復(fù)步驟1 ，合并兩個上清液；
6.3依次加入三氯甲烷、檸檬酸緩沖液，避光過夜；
6.4去除上清液，吹干三氯甲烷；
6.5過柱；
6.6吹干無水甲醇，用甲醇甲苯溶液、KOH甲醇溶液復(fù)溶，水浴，冷卻至室溫；
6.7加入去離子水、冰乙酸溶液、正己烷，收集上清液；
6.8上清液吹干；
6.9復(fù)溶上機(jī)。
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