植物激素是植物細胞接受特定環(huán)境信號誘導(dǎo)產(chǎn)生的、低濃度時可調(diào)節(jié)植物生理反應(yīng)的活性物質(zhì)。在細胞分裂與伸長、組織與器官分化、開花與結(jié)實、成熟與衰老、休眠與萌發(fā)以及離體組織培養(yǎng)等方面，分別或相互協(xié)調(diào)地調(diào)控植物的生長發(fā)育與分化。今天便給大家整理了如何通過高效液相色譜法測定植物激素的流程，具體如下：
一、實驗原理
本實驗以異丙醇/水/鹽酸提取方法提取樣品中植物內(nèi)源激素，以安捷倫1290高效液相色譜儀串聯(lián)AB公司Qtrap6500質(zhì)譜儀測定植物內(nèi)源激素IAA、ABA、IBA、GA1/3/4/7、Z、TZR、IP、IPA、SA、MESA、MEJA、JA。本實驗采用異丙醇/水/鹽酸溶液的方法，通過提取液加酸提高激素在有機溶劑中溶解性并鈍化組織中的部分酶。而后通過二氯甲烷萃取并以氮氣吹掃方式濃縮樣品，該方法流程相對簡單，待測物損失較小，同時由于Qtrap6500儀器的靈敏性，不需過多繁瑣的凈化步驟即可準(zhǔn)確檢測大部分痕量待測物。
二、試劑
2.1異丙醇／鹽酸提取緩沖液
2.2二氯甲烷
2.3 甲醇
2.4 0.1%甲酸
三、主要儀器
臺式高速離心機（德國SORVAL公司）
AR5120電子天平（美國AHOΜS公司）
Aglient1290高效液相色譜儀（美國aglient公司）
SCIEX-6500Qtrap(MSMS)（美國AB公司）
UYC-200全溫培養(yǎng)搖床（上海新苗醫(yī)療器械制造公司）
氮吹儀（杭州米歐儀器有限公司）
四、試樣的制備
取新鮮樣本剪碎充分混勻后，裝入樣本瓶放入4℃冷藏備用。
五、分析步驟
5.1激素提取
（1）準(zhǔn)確稱量約1 g新鮮植物樣品，于液氮中研磨至粉碎；
（2）向粉末中加入10 ml異丙醇／鹽酸提取緩沖液，4℃振蕩30 min；
（3）加入20 ml二氯甲烷，4℃震蕩30 min；
（4）4℃，13000 r/min離心5 min，取下層有機相；
（5）避光，以氮氣吹干有機相，以400 μl甲醇（0.1%甲酸）溶解；
（6）過0.22 μm濾膜，進HPLC-MS/MS檢測。
5.2 液質(zhì)檢測
（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
以甲醇（0.1%甲酸）為溶劑配制梯度為0.1 ng/ml，0.2 ng/ml，0.5 ng/ml， 2 ng/ml，5 ng/ml， 20 ng/ml，50 ng/ml，200 ng/ml的IAA、IBA、ABA、GA1/3/4/7、Z、 TZR、IP、IPA、JA、MEJA、SA、MESA標(biāo)準(zhǔn)溶液。每個濃度做2個重復(fù)，在實際繪制標(biāo)曲方程時去掉線性不好的點。
（2）液相條件
色譜柱：poroshell 120 SB-C18反相色譜柱(2.1×150,2.7 μm)；
柱溫：30℃；
流動相：A:B=（甲醇/0.1%甲酸）:（水/0.1%甲酸）；
洗脫梯度：0-1 min，A=20%；1-9 min，A遞增至80%；9-10 min，A=80%；10-10.1 min，A遞減至20%；10.1-15 min, A=20%
進樣體積：2 μl。
（3）質(zhì)譜條件
氣簾氣：15 psi
噴霧電壓： 4500 v
霧化氣壓力：65 psi
輔助氣壓力：70 psi
霧化溫度： 400℃
表1 植物激素質(zhì)子化或去質(zhì)子化的選擇反應(yīng)監(jiān)測條件([M+H]+or[M-H]-)
