作者：
發(fā)布時間：
2021
-
09
-
02
點擊次數(shù)：
0
赤霉素的測定赤霉素(Gibberellins,GAs)作為植物體內廣泛存在的一類生長調節(jié)劑，是高等植物體內的一類四環(huán)二萜羧酸化合物,參與調控植物種子萌發(fā),下胚軸伸長,葉片伸展,花、果實及種子發(fā)育等諸多生理過程。截至1976 年就從植物中分離鑒定出32種赤霉素，至今,發(fā)現(xiàn)的赤霉素的種類己有百種之多。研究表明,赤霉素在植物抵抗非生物脅迫中也發(fā)揮著重要作用,主要通過調節(jié)GAs的生物合成、信號轉導及其生物活性,以提高植物對非生物脅迫的耐受性。一、實驗方法及原理本次實驗通過提取樣品中植物內源激素，再以安捷倫1290高效液相色譜儀串聯(lián)AB公司Qtrap6500質譜儀，測定植物內源激素。1.試劑以下所有試劑如無特別注明，均為分析純。實驗用水為蒸餾水，去離子水或相當純度的水。赤霉素(GA3)標準品、CNW C18 QuEChers填料、色譜級甲醇、乙腈、乙腈（樣品提取液）。2．儀器設備（1）TG-16G臺式高速離心機、電子天平、Agilent 1290高效液相色譜儀、SCIEX-6500Qtrap(MSMS)、氣浴恒溫搖床、超聲清洗儀、水浴氮吹儀。3.標曲溶液配置（1）取甲醇溶液990 μl加入1.5 ml離心管，加入500 μg/ml每種激素標準品儲備液各2 μl，震蕩均勻，配置為終濃度1 μg/ml的使用母液以備后續(xù)使用。（2）取甲醇溶液999.9 μl、999.8 μl、999.5 μl、999 μl、998 μl、995 μl、980 μl分別加入1.5 ml離心管，而后取步驟（1）中配置的母液分別0.1 μl、0.2 μl、0.5 μl、1 μl、2 μl、5 μl、20 μl順序加入上述甲醇溶液中，配置為終濃度0.1 ng/ml、0.2 ng/ml、0.5 ng/ml、1 ng/ml、2 ng/ml、5 ng/ml、20 ng/ml的標曲溶液。4.流動相配置（1）有機相：取色譜純甲醇900 ml加入1 L容量瓶，加入1 ml甲酸，以甲醇定容至1 L，顛倒混勻。（2）無機相：取超純水900 ml加入1 L容量瓶，加入1 ml甲酸，以超純定容至1 L，顛倒混勻。5.植物激素提取（1）準確稱取樣品約0.3-0.8 g，加入10倍體積乙腈溶液；（2）4℃提取過夜，12000 g離心5 min，取上清液；（3）沉淀再次加入5倍體積乙腈溶液，提取兩次，合并所得上清液；（4）加入15-40 mg C18填料，劇烈震蕩30 s，10000 g離心5 min，取上清液；（5）氮氣吹干，以200 μl甲醇復溶，過0.22 μm有機相濾膜，放入-20℃冰箱待上機檢測。（6）進樣體積：2 ...